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Detecção de RNA baseada em LAMP no Optigene Genie II/III. Sistema de tubo fechado, amplificação de 30 min a 66 °C, confirmação por curva de anelamento. Etapa 3 do sistema de vigilância de arbovírus ProAmpRT™ in-house.
Validação Independente
Burkhalter et al., J Med Entomol 2018 (PMID: 29462341)
PLM-1008 é a etapa de detecção LAMP. De acordo com o procedimento do IFU:
15 µL Master Mix + 4,975 µL WNV_E Primer Mix + 0,025 µL Reverse Transcriptase por reação. Escalar para a corrida + 2 extras. Aliquotar 20 µL em cada poço de fita de 8 tubos Optigene.
Adicionar 5 µL de RNA extraído em cada tubo e tampar imediatamente. Volume total de reação: 25 µL. Use uma área de adição de modelo separada da configuração pré-amplificação para controlar a contaminação.
Amplificação: 66 °C × 30 min. Anelamento: 98 °C → 80 °C a 0,05 °C/seg. Examinar curvas de amplificação e o pico de anelamento (WNV-positivo: 86,4–88,4 °C).
Fonte: PLM-1008 IFU Ver: 160601
Sem ciclagem térmica. Os tubos permanecem fechados após a corrida — de acordo com o IFU, "não abrir após a corrida" para evitar contaminação do amplicon.
Etapa de confirmação integrada. O Genie aumenta de 98 °C a 80 °C a 0,05 °C/seg; o pico de anelamento distingue um verdadeiro WNV-positivo de artefatos de amplificação.
Burkhalter et al. (2018) compararam ProAmpRT LAMP, RAMP e RT-PCR em honey cards; ProAmpRT detectou WNV/ZIKV em múltiplos títulos onde RAMP retornou negativos.
Responsabilidade de fornecedor único. Pro-Lab fornece homogeneização, extração de RNA e detecção LAMP — conjunto completo de IFU, um contato de suporte técnico.
Se você envia pools para o laboratório estadual, o ritmo é o mesmo a cada estação — envie segunda, espere até quinta, e durante a estação de pico o limite pode rejeitar seus envios. PLM-1008 fecha o loop interno. Adicione 5 µL de RNA extraído a um tubo de mix de amplificação, execute 30 minutos a 66 °C no Optigene Genie II/III, leia o pico de anelamento (86,4–88,4 °C confirma WNV-positivo). Resultado de vigilância no mesmo dia, cada pool, cada dia.
A configuração é a mesma a cada execução. Descongele o mix de primer e o master mix no gelo. Combine: 15 µL Master Mix + 4,975 µL WNV_E Primer Mix + 0,025 µL Reverse Transcriptase = 20 µL mix amp; +5 µL de RNA extraído = 25 µL total. Execute no Genie II/III: 66 °C × 30 min, depois anele 98 °C → 80 °C a 0,05 °C/seg. Leia tanto a curva de amplificação quanto o pico de anelamento. Tubo fechado — não abra após a execução.
Laboratórios de saúde pública precisam de três coisas para adotar um método de vigilância: o protocolo por escrito, uma avaliação independente e um fornecedor que forneça todo o fluxo de trabalho. PLM-1008 tem todas as três. O IFU especifica amplificação a 66 °C × 30 min, anelamento 98 °C → 80 °C a 0,05 °C/seg, e um pico de anelamento de 86,4–88,4 °C como sinal WNV-positivo. Burkhalter et al. (2018) compararam ProAmpRT LAMP, RAMP e RT-PCR em tempo real em espécimes de honey card; LAMP detectou amostras WNV/ZIKV que RAMP retornou como negativas.Apenas Pesquisa — vigilância de controle de vetores, não diagnóstico clínico de pacientes.
PLM-1008 é a etapa de detecção. Combine-o com homogeneização upstream e extração de RNA do mesmo fabricante.
Tubos de 2,0 mL pré-preenchidos com esferas de rolamento e Buffer de Trituração. Pools n ≤ 50, 100 preps por kit.
Placas de extração pré-carregadas projetadas para o instrumento Mag Pro-32 — 32 amostras por execução.
Extração de grânulos magnéticos automatizada de 32 amostras com descontaminação UV integrada.
Extração de RNA em coluna de sílica com protocolo publicado para mosquitos. Fluxo de trabalho manual — nenhum instrumento necessário.
Extração de RNA com grânulos magnéticos manual com ímã de mão. Capacidade de processamento flexível; nenhum instrumento necessário.
Leitor LAMP isotérmico obrigatório com análise de amplificação e anelamento. Especificado pelo IFU PLM-1008.
| Especificação | Valor |
|---|---|
| Número do Catálogo | PLM-1008 |
| Tipo de Produto | Kit de Mistura de Primers LAMP (RUO) |
| Designação RUO | "Não para uso clínico." Apenas para pesquisa — vigilância de controle de vetores, não para diagnóstico clínico |
| Reações por Kit | 100 |
| Conteúdo do Kit | Pro-AmpRT WNV_E Primer Mix (PLM-1008); Pro-AmpRT Master Mix (PLM-501); Pro-AmpRT Reverse Transcriptase (PLM-500) |
| Configuração por Reação | 15 µL Master Mix + 4,975 µL WNV_E Primer Mix + 0,025 µL Reverse Transcriptase = 20 µL mix de amplificação; +5 µL amostra = 25 µL total |
| Leitor de Detecção | Optigene Genie II / Genie III |
| Tiras de Tubos | Tiras de 8 Tubos Optigene (cat# OP-0008) |
| Amplificação | 66 °C × 30 min |
| Anelamento | 98 °C → 80 °C a 0,05 °C/seg |
| Pico de Anelamento WNV | 86,4 – 88,4 °C |
| Método de Detecção | Fluorescência (tubo fechado) |
| Espécime | RNA extraído (do fluxo de trabalho anterior PLM-2008 → PLM-2007 / PLM-2004 / PLM-2000) |
| Transporte Refrigerado | Obrigatório (nota do fabricante) |
| Classificação GHS | Não classificado como perigoso de acordo com GHS. NFPA: Saúde 0 / Fogo 1 / Reatividade 0. Fonte: PLM-500 (Reverse Transcriptase) SDS + PLM-PrimerMix (PLM-1000 series) SDS. Componentes confirmados como não-perigosos conforme OSHA 29CFR1910.1200 / EU CLP. A química do buffer do produto irmão (PLM-2000 / PLM-2004 IFUs) divulga azida sódica 0,05% como conservante — aplicável ao master mix PLM-501; não descarte reagente não utilizado na pia. |
| Fabricante | Pro-Lab Diagnostics USA |
Especificações obtidas de PLM-1008 IFU Ver: 160601. Classificação de hazard GHS confirmada a partir de SDSes de componentes PLM-500 (enzima RT) e PLM-PrimerMix — ambos não-perigosos conforme OSHA / GHS. Armazenamento e validade por SKU pendentes de confirmação da Pro-Lab Diagnostics; consulte o IFU do kit para manuseio específico de componentes.
Precificação para seu distrito ou programa em 1 dia útil.
Demonstração do sistema ProAmpRT de 20 minutos — virtual ou presencial.
PLM-1008 · 100 reações por kit · Consumíveis ProAmpRT.
Aplicações de controle vetorial · (512) 832-9145
Apenas para Pesquisa — Não para Uso em Procedimentos Diagnósticos. O Pro-AmpRT WNV Isothermal Kit (PLM-1008) é designado Apenas para Pesquisa conforme cabeçalho do IFU (Ver: 160601 — verbatim "Not for Clinical Use"). O sistema é destinado a vigilância de controle vetorial e saúde pública — não para diagnóstico clínico de pacientes. O estudo Burkhalter et al. (J Med Entomol. 2018; PMID: 29462341) avaliou espécimes de cartão de mel, não homogeneato de pool de mosquitos; o desempenho em pools de mosquitos pode diferir. A condição de corrida "amplificação de 30 minutos a 66 °C" é verbatim do PLM-1008 IFU Ver: 160601.
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